产品简介:
DEAE-Dextran细胞转染试剂盒(DEAE-Dextran Transfection Kit)是一种适合于把DNA转染到培养的真核细胞中的转染试剂盒。
关于DEAE-dextran的细胞转染方法早在1968年就有相关论文发表。DEAE-dextran可以促使DNA结合到细胞膜上,然后通过内吞作用(endocytosis)进入细胞。基于DEAE-dextran的细胞转染方法适用于瞬时转染(transient tranfection),但不适用于筛选稳定表达细胞株。DEAE-dextran在较高浓度作用较长时间会对细胞产生一定毒性。
目前基于DEAE-dextran的细胞转染方法有两种,一种方法为把DNA和DEAE--dextran混合后加入到细胞中,另一种方法为先用DEAE?-dextran预处理细胞,然后再加入DNA。后一种方法是在前一种方法的基础上经过改进而产生的,对于一些细胞包括Hela、COS、NIH3T3和KB细胞等,后一种方法可以增加细胞对DNA的摄入量,显著改善转染效果。氯喹的加入可以抑制溶酶体对外源DNA的降解,从而提高转染效率。但对于具体的细胞、具体的培养条件,如需获得更加理想的转染效率,必须自行摸索上述各种转染方法,找出优化的转染方法。
基于DEAE-dextran的细胞转染方法不仅可以转染贴壁细胞,也可以转染悬浮细胞。
转染效率可以通过转染表达EGFP或其它荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。
关于不同的细胞转染试剂的主要特点和差异方面的比较,以及如何选择适当的细胞转染试剂,可参考上海华潍的相关网页:http://www.huaweipharma.cn
对于六孔板而言,一个包装的本转染试剂如使用常规方法可以转染2500个孔,如使用预处理方法可以转染200个孔。
保存条件:
4℃保存,一年有效。
注意事项:
使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒,可以使用上海华潍生产的质粒大量抽提试剂盒(PHWE0043)进行抽提,以保证获得较高的转染效率。
转染前细胞必须处于良好的生长状态。
试剂盒中各试剂均经过无菌处理,可以直接使用。在细胞转染过程中要严格注意无菌操作。
需自备用于洗涤的PBS或HBSS,以及用于稀释10XPBS的无菌水。
稀释或配制DEAE-Dextran溶液或DNA的1XPBS可以用试剂盒中提供的10XPBS稀释。
氯喹溶液对人体有害,请注意适当防护。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。