产品简介:
BeyoAP Alkaline Phosphatase,即BeyoAP碱性磷酸酶,是一种热敏感的,可以催化DNA、RNA、核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸水解释放5′或3′末端磷酸基团的酶,也可以脱去蛋白质丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基上的磷酸基团。BeyoAP Alkaline Phosphatase是一种新型碱性磷酸酯酶,在上海华潍的各种内切酶和PCR缓冲液中可保持100%活性,对于各种类型的DNA 5′末端的去磷酸化均可在37℃孵育10分钟即可完成,并且75℃孵育5分钟即可完全失活。
经限制性内切酶酶切的质粒5′端带有磷酸基团,在进行基因克隆时为避免质粒自连,可以使用BeyoAP Alkaline Phosphatase去除5′末端磷酸基团。脱去5′末端磷酸基团的质粒不能发生自连。
特点:快速去磷酸化,只需37℃孵育10分钟即可;快速失活,75℃孵育5分钟即可完全失活;使用方便,在各种内切酶和PCR缓冲液中保持100%活性,可以和质粒DNA的消化同时进行;操作步骤简单,对于5′或3′突出末端、平端等各种DNA的脱磷酸化采用完全相同的操作步骤;可直接用于连接反应,经BeyoAP Alkaline Phosphatase脱磷,并75℃孵育5分钟失活后可直接用于后续的连接反应。
用途:通过去除载体或DNA片断5′末端的磷酸基团,防止载体或DNA片断自连;质粒DNA的同时内切酶消化和脱磷;通过5′末端脱磷,为5′末端磷酸化放射性标记准备模板;去除DNA、RNA 5′或3′末端的磷酸基团;用于蛋白质丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的去磷酸化。
来源:大肠杆菌表达,表达基因为一种细菌碱性磷酸酯酶基因。
酶活性定义:37℃10分钟内,催化1μg 线性化的pUC19 DNA5′末端脱磷所需的酶量定义为一个活力单位。
纯度:不含DNA外切酶和内切酶,不含RNA酶。
酶储存溶液:20mM HEPES-NaOH(pH7.4),1mM MgCl2,0.1mM ZnCl2,0.1% Triton X-100,
50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X):100mM Tris-HCl(pH8.0 at 37℃),50mM MgCl2,1M KCl,0.2% Triton X-100,10mM 2-mercaptoethanol,1mg/ml BSA。
失活或抑制:75℃加热5分钟可以使BeyoAP Alkaline Phosphatase失活。金属离子螯合剂对BeyoAP Alkaline Phosphatase有抑制作用。
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。